抗小鼠胰島素抗體(IAA)試劑盒

(用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)

原理

本實驗采用間接ELISA法。用Insulin抗原包被于酶標板上，標準品和樣品中的IAA抗體與抗原結合，加入HRP標記的Protein A，形成**復合物連接在板上，加入底物工作液顯藍色，*后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，IAA濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中IAA抗體的濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準備試劑與收集血樣

1. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
2. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。血清、血漿作1：11稀釋（取10ul，加1×標本稀釋液100ul震蕩混勻,稀釋11倍）。
3. 標準品液配制：設標準管8管，**管加標本稀釋液900ul，**至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入200ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至**管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃30分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應10分鐘。
6. 每孔加入100ul終止液混勻。
7. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0 ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應IAA含量，再乘上稀釋倍數即可。

試劑盒性能

            1. 靈敏度：*小的IAA檢測濃度小于0.2ng/ml。

2. 特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠IAA。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內、板見變異系數均小于10％。

注意事項

            1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致**度誤差及OD值錯誤地升高。

            3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

            4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！