大鼠睪酮(Testosterone)ELISA試劑盒

(用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

原理

本實(shí)驗采用酶聯(lián)競爭法及生物素-親和素放大實(shí)驗原理。樣品中的Testosterone、生物素標(biāo)記Testosterone與固相板上的抗體Testosterone發(fā)生競爭結(jié)合。反應(yīng)平衡后，再加入HRP酶標(biāo)記的親和素，形成 固相抗體-生物素化Testosterone-親和素-HRP復(fù)合物。加入底物工作液顯色，*后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，隨著樣品中Testosterone濃度的升高，OD值成逐漸下降的線性關(guān)系，可通過OD值比對標(biāo)本中Testosterone抗體的濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）。
2. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取6個1.5ml離心管，**管加1×洗滌液900ul，**至第六管加入1×洗滌液400ul。在**管中加入200ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至**管。如此反復(fù)作3倍比稀釋，從第五管中吸出200ul棄去。第六管為零孔。

檢測程序

1. 加樣：每孔加入**抗體工作液50ul，反應(yīng)10分鐘。然后每孔依次各加入標(biāo)準(zhǔn)品，待測樣品50ul，每孔加入生物素-Testosterone各50ul（空白孔除外）。蓋緊封板膜以避免交叉污染。將反應(yīng)板置振蕩器（400-500rpm）室溫（18-25℃）120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
6. 每孔加入100ul終止液混勻。
7. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果計算與判斷

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算。如空白OD低于0.1，也可以直接計算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品20、6.67、2.22、0.74、0.24、0.08、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)Testosterone含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。

試劑盒性能

            1. 靈敏度：*小的Testosterone 檢測濃度小于0.04ng/ml。

2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠Testosterone。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10％。

注意事項

            1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致**度誤差及OD值錯誤地升高。

            3. 檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

            4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

            5. 說明書中試劑盒組成為96T的量，48T的量應(yīng)減半！

6. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！